你知道該如何選擇判斷RIPA裂解液么?下面就讓我們一起來了解一下吧。
 

　　一、如何選擇合適的RIPA裂解液?
 

　　如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)，該裂解液在裂解細胞或組織后一般不會形成粘滯的透明狀DNA團塊，不必采用超聲處理就可進行下一步操作。同時，該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測。
 

　　如果使用免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比較特殊，我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。
 

　　如果您的蛋白是難溶性的蛋白，建議您可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液，如RIPA裂解液(強/中);如果您在做IP實驗的時候發(fā)現(xiàn)背景很高，即有很多非特異性蛋白被IP下來，這時候您需使用裂解強度較強的裂解液，比如RIPA裂解液(強/中)。
 

　　反之，如果您發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法IP下來，則說明您使用的裂解液強度過強，此時需使用裂解強度較弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。
 

　　二、如何判斷細胞的裂解程度?
 

　　細胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的細胞，沒有細胞沉淀，很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導致的;相反，如果RIPA裂解液后出現(xiàn)膠狀物體，離心不能沉淀則可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少導致的。
 

　　組織裂解：先將組織剪成細小的碎片，之后利用勻漿器或超聲破碎的方法，鏡檢顯示細胞破碎率大于90%，同時組織已經(jīng)*裂解，沒有明顯的小組織塊。之后按照細胞裂解的步驟進行裂解，裂解程度的判斷標準與細胞裂解一致。
 

　　RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則需通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。