III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作， 即可同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作方便快捷。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以用于PCR，克隆基因III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
Script III lncRNAcDNA Synthesis Kit（With dsDNase）
lncRNAcDNA 第一鏈合成試劑盒（去基因組）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
目錄號(hào):71500
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71500-50 25 rxns (20 μl/rxn) | 71500-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x TRUE Reaction Mix | 100 μl | 400 μl |
dsDNase | 25 μl | 100 μl |
lncRNA-RT primer | 25 μl | 100 μl |
RNase free H2O | 1 ml | 1.5 ml |
保存條件：-20℃保存，有效期 12 個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作， 即可同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作方便快捷。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以用于PCR，克隆基因；也可以用于qPCR，兼容染料法和探針?lè)?，用?lái)檢測(cè)高拷貝或低拷貝基因。
lncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒是專門(mén)針對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）反轉(zhuǎn)錄而開(kāi)發(fā)的產(chǎn)品。與 mRNA 相比，lncRNA具有豐度低、GC 含量差異大、二級(jí)結(jié)構(gòu)更復(fù)雜等特性，傳統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄試劑lncRNA 難以達(dá)到理想的效果。本試劑盒含有高效去除基因組 DNA 的 dsDNase，可有效避免殘留的基因組DNA 對(duì)后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的干擾。本試劑盒中中使用的反轉(zhuǎn)錄酶是通過(guò)分子改造后的新型反轉(zhuǎn)錄酶，具有更強(qiáng)的 RNA 親和性和熱穩(wěn)定性，使本試劑盒在通讀 GC 含量高，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，低豐度的 RNA 模板和抗逆性等方面表現(xiàn)突出，特別適合表達(dá)水平相對(duì)較低，二級(jí)結(jié)構(gòu)相對(duì)復(fù)雜的 lncRNA 的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
操作步驟：第一連cDNA合成 (以20 μl反應(yīng)體系為例)
1．反應(yīng)體系的配制
使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制：(使用前，請(qǐng)將各組分輕彈混勻，點(diǎn)甩離心收集至管底，置冰上備用。)
Components | Volume |
Total RNA/mRNA | 50 ng - 5 μg / 5 ng -500 ng |
lncRNA-RT primer | 1 μl |
5x TRUE Reaction Mix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
RNase free H2O | To 20 μl |
2．輕柔吸打混勻，點(diǎn)甩離心，置 PCR 儀進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
25℃孵育 10 min 后，產(chǎn)物用于 PCR，42℃孵育 30 min；產(chǎn)物用于 qPCR，42℃孵育 15 min。
注意：如果模板具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高 GC 區(qū)域，可以先只加 RNA 模板、引物和 RNase free H2O，混勻，65℃變性 5 min，冰上冷卻，點(diǎn)甩離心后加入其它成分，將 42℃孵育溫度提升至 50°C，有助于提高產(chǎn)量。
3． 85°C加熱 5 sec，失活RTase和dsDNase，終止反應(yīng)。
逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng)，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用；長(zhǎng)期存放建議分裝后在-70°C保存，cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。
PCR（建議取2 - 4 μl的cDNA產(chǎn)物原液作為PCR模板。）
1. 常規(guī)擴(kuò)增： 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)
2. 高保真擴(kuò)增：71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb，15sec/k)
qPCR（建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。如果基因表達(dá)量較高，可以根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用。）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
